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        人骨保護素(OPG)酶聯免疫吸附測定試劑盒

        人骨保護素(OPG)酶聯免疫吸附測定試劑盒

        簡要描述:人骨保護素(OPG)酶聯免疫吸附測定試劑盒
        本實驗采用雙抗體夾心ELISA法。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯免疫吸附測定試劑盒(ELISA)。預先包被的抗體為抗人CITH3單克隆抗體。檢測相抗體為多克隆抗體,經生物素(biotin)標記。樣品和生物素標記抗體先后加入酶標板孔反應后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標記的親

        產品型號:

        廠商性質:生產廠家

        更新時間:2021-09-27

        訪問量:47

        詳情介紹
        品牌自營品牌CAS-------------
        分子式-------------------純度------
        分子量------貨號SPR105867H
        規格48t/96T供貨周期現貨
        主要用途科學研究檢測試劑盒應用領域醫療衛生,環保,食品,生物產業,農業
        產品英文名稱Human OPG(Osteoprotegerin) ELISA Kit待測物名稱細胞、血清、組織、唾液、灌洗液、尿液等
        產品類型國產/進口規格48T/96T

        人骨保護素(OPG)酶聯免疫吸附測定試劑盒

        實驗原理
        本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。在預包被抗人髓系細胞觸發受體
        -1 (TREM-1)抗體(固相抗體)的微孔酶標板中,加入人髓系細胞觸發受體-1 (TREM-1)
        校準品和待測樣本,再加入另一株 HRP 標記的抗人髓系細胞觸發受體-1 (TREM-1)抗體(酶
        標抗體),經過溫育與充分洗滌,去除未結合的組分,在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-
        酶標抗體的夾心復合物。加底物 A 和 B,底物在 HRP 催化下,產生藍色產物,在終止液(2M 硫
        酸)作用下,最終轉化為黃色,在酶標儀 450nm 波長上測定吸光度(OD 值),吸光度(OD 值)
        與待測樣品中人髓系細胞觸發受體-1 (TREM-1)的濃度正相關。擬合校準品曲線,可以計算
        出樣本中人髓系細胞觸發受體-1 (TREM-1)的濃度。
        試劑盒限制性
        1、僅供科研使用,不得用于臨床診斷。
        2、在試劑盒標示的有效期內使用,過期產品不得使用。
        3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
        4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。
        5、如果樣本值高于最高標準品濃度值,請將樣本適當稀釋后,再重新測定。
        6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結果,檢測前,請排出該因素。
        7、通過其他方法得到的檢測結果,與本試劑盒測定結果不具有直接的可比性。
        技術提示
        1、混合蛋白溶液時,避免起泡。
        2、加校準品與樣本時,每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭,公共組分應該懸臂加樣,
        避免交叉污染。
        3、合適的溫育時間,和充分的洗滌步驟,是保證實驗結果準確性的必要條件。
        4、使用自動洗板機時,加入一個 30 秒浸泡的步驟,可以提高檢測精度。
        5、底物溶液為無色液體,保存過程中變為藍色,代表底物溶液已經失效,不得使用。
        6、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致,加入終止液后,藍色底物產物,會瞬間變為黃
        色。
        7、實驗中,用剩的板條,應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
        8、所有液體組分,使用前充分搖勻,嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫
        育操作

        人骨保護素(OPG)酶聯免疫吸附測定試劑盒


        試劑盒組分與保存
        未開封的試劑盒保存在 2-8 度,不得使用過期試劑盒。
        組分
        數量
        主要成分
        開封后儲存
        校準品
        0.3ml/管
        --
        2-8℃14 天
        包被微孔板
        96T/48T
        預包被固相抗體
        2-8℃14 天
        HRP 標記抗體
        10mL
        HRP 標記的檢測抗體
        2-8℃14 天
        樣本稀釋液
        6mL
        --
        2-8℃180 天
        底物液 A
        6mL
        0.01%過氧化氫
        2-8℃180 天
        底物液 B
        6mL
        0.1%TMB
        2-8℃180 天
        終止液
        6mL
        2mol/L 稀硫酸
        2-8℃180 天
        20×濃縮洗滌液
        25mL
        0.05%Tween20
        2-8℃180 天
        說明書
        1 份
        --
        --
        自封袋
        1 個
        --
        --
        不干膠
        2 片
        --
        --
        校準品濃度依次為:240、 120、 60、 30、 15、 7.5 pg/mL。
        其他用品
        1、酶標儀(450nm)
        2、精密移液器及一次性吸頭
        3、蒸餾水
        4、洗瓶或者自動洗板機
        5、37℃水浴鍋或恒溫箱
        6、500ml 量筒
        生物安全
        1、檢測必須符合實驗室管理規范的規定,嚴格防止交叉污染,所有樣品、洗棄液和各種廢棄
        物都應按照傳染物進行處置。
        2、試劑盒的液體組分中,含有 proclin-300 防腐劑,可能引起皮膚過敏反應,避免吸入煙霧
        與皮膚接觸。
        3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入煙霧。
        4、戴上防護手套,實驗完成后徹底洗手。僅供科研使用,不得用于臨床診斷。
        4
        樣品的采集和儲存
        以下只是列出樣品采集和保存的一般指南。所有樣本采集保存過程中,不得使用疊氮鈉
        做為防腐劑。
        1、細胞培養上清:4000rpm 條件下離心 20min,去除細胞顆粒和聚合物,上清液保存在- 20℃
        以下,避免反復凍融。
        2、血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,4000rpm 條件下離
        心 20min,小心地分離出血清,保存在-20℃以下,避免反復凍融。
        3、血漿:肝素,EDTA,或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在 4000rpm 條件下,離心 20 分鐘取上清,
        血漿保存在-20℃以下,避免反復凍融。
        樣本收集后,無法一次檢測完畢,請按一次用量分裝凍存,避免反復凍融,使用時在室溫
        下解凍,確保樣品均勻充分解凍。
        4、組織勻漿用預冷的 PBS (0.01 M,pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液,稱重后將組織剪碎。
        將剪碎的組織與對應體積的 PBS(一般按 1: 9 的重量體積比,比如 1g 的組織樣品對應 9 mL
        的 PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在 PBS 中加入蛋白酶抑制
        劑)加入玻璃勻漿器中,在冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行
        超聲破碎或反復凍融。最后將勻漿液 5000×g 離心 5-10 分鐘,取上清檢測。
        5、細胞提取液:貼壁細胞用冷的 PBS 輕輕清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g 離心 5 分鐘
        后收集細胞;懸浮細 胞可直接離心收集。收集的細胞用冷的 PBS 洗滌 3 次。每 1×106 個
        細胞中加入 150-200μLPBS 重懸并通過反復凍融使細胞破碎(若含量很低可減少 PBS 的體
        積)。將提取液于 1500×g 離心 10 分鐘,取上清檢測。
        6、其他生物體液:1000×g 離心 20 分鐘,除去雜質及細胞碎片。取上清檢測。

        試劑準備
        1、使用前,所有的組分都要至少復溫 60min,確保充分復溫到室溫。
        2、濃縮洗滌液:從冰箱取出的濃縮洗滌液,會有結晶產生,這屬于正?,F象,水浴加熱使結
        晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水,按 1:20 稀釋,即 1 份的濃縮洗滌液,添加 19 份的蒸
        餾水。
        3、底物:底物液 A 和 B,在使用前,按 1:1 體積充分混合,混合后 15 分鐘內使用。
        僅供科研使用,不得用于臨床診斷。
        5
        操作程序
        所有試劑和組分都先恢復到室溫,標準品、質控品和樣品,建議做復孔。
        1、按前面說明書描述的方法,配制好試劑盒各種組分的工作液。
        2、從鋁箔袋中取出所需板條,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
        設置標準品孔、0 值孔、空白孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL,0 值
        孔加樣本稀釋液 50μL,空白孔不加,樣本孔加待測樣本 50μL。
        3、除空白孔外,標準品孔、0 值孔和樣本孔,加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體
        100μL。
        4、用封板膜蓋住反應板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
        5、揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置 20S,甩去洗滌液,吸水
        紙上拍干,如此重復 5 次。若使用自動洗板機,請按洗板機操作程序進行洗板,添加浸泡
        30s 的程序,可以提高檢測的精度。洗板結束,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,充分
        拍干反應板。
        6、將底物 A 和 B 按 1:1 體積充分混合,所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜蓋住反
        應板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 15min。
        7、所有孔加入終止液 50μL,在酶標儀上讀取各孔吸光度(OD 值)。









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